您好，今天边肖刀哥将为您解答以上问题。结晶紫有毒吗？相信很多朋友还不知道。现在让我们来看看！

1.结晶紫染色法测定细胞数:1。在96孔细胞培养板的每个孔中加入0.1ml含5× 104 ~ 10× 4个Wehi-164细胞的培养液(含10%小牛血清的RPMI-1640培养液)，在37℃、含5% CO2的二氧化碳培养箱中培养2 ~ 3小时。

2.2.将TNF标准品用RPMI-1640培养液稀释10倍，根据需要将待测样品稀释3-5倍，每孔加入0.1ml稀释的标准品或待测样品，每次稀释重复3孔。

3.6个对照孔，将含有4μg TNF的0.1ml RPMI-1640培养基加入到3个阳性对照孔中，将100μl RPMI-1640培养基加入到3个阴性对照孔中。

4.继续培养18-24小时。

5.3.扔掉培养基，用PBS仔细冲洗一次，向每个孔中加入0.1ml 10%甲醇溶液，固定细胞30秒。

6.4.吸取甲醇溶液，在每个孔中加入0.1ml结晶紫染料溶液，室温放置20分钟。

7.5.轻轻抖落染料溶液，用蒸馏水冲洗每个孔，将培养皿倒置在吸水纸上吸水。

8、自然干燥或37℃烘干。

9.这块木板可以在室温下存放很长时间。

10.6.测量前，在每个孔中加入0.1毫升33%的醋酸进行脱色，充分振荡后测量570nm处的光吸收。

11.用吸光度(OD)值绘制样品的稀释度，并将标准曲线与待测样品的曲线进行比较，以获得待测样品中的细胞因子活性。

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