1.免疫荧光技术是通过化学方法将荧光素(如异硫氰酸荧光素，FITC)与相应的抗体(或抗原)结合，将荧光标记的抗体(或抗原)与标本中相应的抗原结合，形成荧光标记的抗体-抗原复合物，用荧光显微镜观察。

2.当显微镜下存在荧光时，推断抗原抗体复合物的存在，根据已知抗体(或抗原)可以推断另一种未知抗原(或抗体)的存在。

3.1.直接免疫荧光直接免疫荧光是将荧光色素标记的特异性抗体与相应的抗原直接结合来鉴定未知抗原。

4.该方法具有操作简单、疗程短、特异性高等优点，但也存在不能检测抗体、灵敏度差等缺点。

5.(1)将荧光素标记的抗体滴在标本上，并放入湿盒中。

6.在37℃孵育30分钟。

7.(2)用PBS洗干净后，分三缸在PBS中浸泡，每缸3min。

8.(3)在(3)PBS中浸泡1 ~ 2分钟并风干。

9.(4)缓冲甘油密封片。

10.在荧光显微镜下观察。

11.直接免疫荧光要注意:①孵育时，载玻片必须放在湿盒中，防止液体蒸发。

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12.(2)在PBS中浸泡时，要不断振荡。

13, 2.间接免疫荧光间接免疫荧光使用荧光素标记抗球蛋白抗体。抗体与相应的抗原结合后，荧光标记的抗球蛋白抗体与结合的抗体反应，从而推断抗原或抗体的存在。

14、间接荧光技术可以用已知抗原检测未知抗体，也可以用已知抗体检测未知抗原。

15.以检测流行性出血热病毒(IgM)抗体为例，介绍如下:(1)将待测患者血清加入抗原片(感染流行性出血热病毒的Vero-E6细胞片)，每份稀释液加2孔，最后2孔加PBS作为对照。

16.将载玻片放入湿盒中，在37℃下孵育60分钟。

17.取出载玻片，弃去反应液，用PBS洗涤5min，风干。

18.(2)加入1∶40稀释的FITC标记的羊抗人IgM，37℃孵育60分钟。

19.取出载玻片，按照步骤2清洗，风干。

20、(3)PBS甘油密封，荧光显微镜观察。

21.阳性结果:细胞膜和细胞质内可见颗粒状荧光颗粒，细胞核呈红色。

22.注意事项:孵育时，将载玻片放在湿盒中，防止液体蒸发。

23.选择低温、干燥、清洁的环境进行风干。

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